ELISA試劑盒實驗如何制備抗體

　　ELISA試劑盒途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學活性抗原，通常不宜選用靜脈打針。
 

　　不一樣個別對共同抗原的反應性不一樣，而且不一樣抗原發作免疫反應的能力也有強有弱，因此常常在打針抗原的一起，參與能增強抗原的抗原性物質，以影響機體發作較強的免疫反應，這種物質稱為免疫佐劑。
 

　　免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需求量佐劑置乳缽中研磨，均勻后再邊磨邊滴參與等容積抗原液(其中加卡介苗3～4mg/ml或不加)，加完后再繼承研磨成乳劑，滴于冰水上5～10min內*不分散停止。
 

　　交叉反應率低，標明抗血清的特異性好，反之則特異性差。
 

　　收集的血液置于室溫下1h支配，凝聚后，置4℃下，過夜(切勿冰凍)分出血清，離心，4000rpm，10min。
 

　　取兔血有兩種方法，一是耳緣靜脈或耳動脈放血，二是頸動脈入血，也可心臟采血。加強免疫時用不*佐劑，初度免疫時皮下打針百日咳疫苗0.5ml，加強免疫時不必打針百日咳疫苗。
 

　　在無菌條件，吸出血清，分裝(0.05～0.2ml)，貯于-40℃以下冰箱，或凍干后儲存。
 

　　取動脈或靜脈放血時，將兔放入一個特造的木匣或籠內，耳露于箱(籠)外，也可由另一人捉住兔身。
 

　　避免丟掉抗原，亦可用一打針器裝抗原液，另一打針器裝佐劑，二者以聚乙烯塑料管聯接，然后二者往復重復抽吸，約數十分鐘后即能*乳化。
 

　　每2～3周加強免疫一次。
 

　　制作方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保留備用。
 

　　ELISA試劑盒特異性是以交叉反應率來標明的。
 

　　交叉反應率通常是用比賽抑制曲線來判定的。
 

　　若用兔，用純種新西蘭兔，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜。
 

　　家兔是z常用以發作抗體的動物，因此這兒首要談論兔血的收集。
 

　　頸動脈放血時，將兔仰臥，固定于兔臺，剪去頸部的毛，切開皮膚，顯露頸動脈，插管，放血。
 

　　不一樣濃度的抗原和近似抗原物質分別做比賽抑制曲線，計算各自的聯絡率(B/T或B/B0)，求出各清閑IC50時的濃度，按下列公式計算交叉反應率。二禮拜后，可在另一耳放血。
 

　　此法可重復屢次放血。
 

　　作免疫用的動物有哺乳類和禽類，首要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。
 

　　在第2次加強免疫后2周，從耳緣靜脈取2～3ml血，制備血清，檢查抗體效價。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血，鼠等小動物取血可參看有關材料。
 

　　剪去耳緣的毛，用少數二甲苯涂改耳廓，30s后，耳血管擴大、充血。用手輕拉耳尖，以單面剃須刀或尖的手術刀片，敏捷切開動脈或靜脈，血液即流出，每次可收集30～40ml。
 

　　抗原劑量，初度劑量為300～500μg，加強免疫的劑量約為初度劑量為1/4支配。
 

　　C冰箱保留。檢查合格后即以其中一打針器作打針用。
 

　　佐劑除了延伸抗原在體內的存留時間，添加抗原影響效果外，更首要的是，它能影響網狀內皮系統，使介入免疫反應的免疫活性細胞增多，推進T細胞與B細胞的相互效果，然后增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的發作。
 

　　ELISA試劑盒未抵達預期效價，需再進行加強免疫，直到滿足時停止。